鈣黃綠素乙酰甲酯

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Calcein, AM

CAS#：148504-34-1

中文名：3'-O-乙酰胺-2',7'-二（羧乙基）-4或5-羧基熒光素,二乙酰甲酯

英文名：3',6'-Di（O-acetyl）-4',5'-bis[N,N-bis（carboxymethyl）aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester

別名：鈣黃綠素乙酰甲酯

分子式：C46H46N2O23

分子量：994.86

性質(zhì)：

　　1. 外觀：白色或淺黃色晶體

　　2. 純度：≥90%（HPLC）

　　3. 產(chǎn)品描述：

Calcein, AM是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，它穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑（如BCECF, AM和CFDA）相比，Calcein, AM的細(xì)胞毒性很低。Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為490 nm和515 nm。

Calcein, AM僅對(duì)活細(xì)胞染色。作為核染色染料的PI不能穿過(guò)活細(xì)胞的細(xì)胞膜，它穿過(guò)死細(xì)胞膜的無(wú)序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核，并嵌入細(xì)胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光（激發(fā)：535 nm，發(fā)射：617 nm），因此PI僅對(duì)死細(xì)胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。用545 nm激發(fā)，僅可觀察到死細(xì)胞。根據(jù)以上特點(diǎn)，Calcein, AM和PI經(jīng)常被結(jié)合用來(lái)作為活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色。

由于不同細(xì)胞系的最佳染色條件不同，我們建議個(gè)別確定Calcein, AM和PI的合適濃度。

　　4. 使用方法

　　（1）用DMSO制備1 mM 的Calcein, AM溶液，并用PBS將其稀釋制成1～50 μM的Calcein, AM溶液。注：如果Calcein, AM很難進(jìn)入細(xì)胞，可以使用表面活性劑，如Pluronic F127。

　　（2）將1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的Calcein, AM溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。注：也可以用1/10濃度的Calcein, AM溶液代替培養(yǎng)基。

　　（3）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞15～30分鐘。

　　（4）用PBS或適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌細(xì)胞兩次。

　　（5）用490 nm激發(fā)波長(zhǎng)，515 nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

　　儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。